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      產(chǎn)品中心

      Product Center

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      腦粘體蟲PCR檢測試劑盒說明書

      產(chǎn)品簡介

      腦粘體蟲PCR檢測試劑盒說明書
      上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
      AST檢測試劑盒可以運用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況

      更新時間:2021-03-13
      訪問次數(shù):451
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      組成及試劑配制:
      1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
      2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
      3、 樣品稀釋液:1×20ml。
      4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
      5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
      注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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       產(chǎn)品名稱

       腦粘體蟲PCR檢測試劑盒說明書

       英文名稱

       Myxosoma cerebralisPCR

       貨號

       LZP7043

      實驗過程:
      一、試劑準(zhǔn)備
      1. DNA模板
      2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
      3.10×PCR Buffer
      4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
      5.Taq酶
      二、操作步驟
      1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      ddH2O至               50 μl
      PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
      2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
      3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
      4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
      三、注意事項
      1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
      2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
      3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
      4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
      5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
      6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
      7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
      一、 試劑的準(zhǔn)備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
      試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
      熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
      7.2 qPCR反應(yīng)條件
      將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
      推薦循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
      L-Alanine人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基2,3-戊二酮 98%

      D-Alanine人肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基六氟鋯酸 45%溶液

      DL-Alanine人肺大動脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基乙酰 98%

      β-Alanine人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基芹菜素 97%

      BOC-L-Alanine人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基扁桃苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%

      BOC-D-Alanine人肺動脈成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基5-氨基乙酰酸鹽酸鹽 99%

      L-Alanine ethlester hydrochloride人肺泡上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基蘆薈大黃素 95%

      D-Alanil人氣管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基氧化苦參堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品

      L-Arginine人支氣管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基氧化苦參堿 98%

      D-Arginine人小氣道上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基黃芩素 98%

      DL-Arginine人肺成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基鹽酸小檗堿 98%

      L-Arginine HCL人支氣管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基黃芩苷 90%

      L-精氨酸琥珀酸鋇鹽人小氣道平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基隱丹參酮 98%

      L-NNA人氣管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基秋仙堿 98%

      L-NAME人支氣管成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基金雀花堿 98%

      L-Citrulline人呼吸道上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基蟲草素  98%

      倍他米松(標(biāo)準(zhǔn)品)OTR(oxytocin receptor)  縮宮素受體TIA1  細(xì)胞毒顆粒相關(guān)蛋白TIA-1抗體

      比阿培南OXR (Orexin receptor)  食欲素受體(多肽)Thyroxine Binding Globulin/TBG/Serpin A7  甲狀腺素結(jié)合球蛋白抗體

      比阿培南(標(biāo)準(zhǔn)品)P2P-R/RBBP6(proliferation potential protein related)  增殖潛能相關(guān)蛋白抗原THYN1  胸腺細(xì)胞核蛋白1抗體

      聯(lián)苯芐唑P19ARF  p19ARF抑癌基因抗原Thymulin  胸腺素抗體

      聯(lián)苯芐唑(標(biāo)準(zhǔn)品)phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) peptide  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗原Thymosin beta 4  胸腺素β4抗體

      膽紅素(標(biāo)準(zhǔn)品)MKK3(MAP Kinase Kinase 3)  絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗原Thymosin Alpha-1/PTMA  胸腺肽α1抗體

      膽紅素P53(wt-p53)  腫瘤抑制基因抗原(野生型P53)Thymidylate synthase/TS  胸苷酸合成酶抗體

      比伐盧定(TFA)Mtp53(Mutant type p53)  突變型P53抗原Thy-1/CD90/ Thy1.1  CD90抗體

      比馬前列腺素/貝美前列素WIG-1(wtp53-induced gene 1)  野生型p53誘導(dǎo)基因1抗原THSD1  血小板跨膜反應(yīng)蛋白1抗體

      比馬前列腺素/貝美前列素(標(biāo)準(zhǔn)品)P73 protein  P73腫瘤抑制基因抗原THRSP  甲狀腺激素反應(yīng)蛋白抗體
      腦粘體蟲PCR檢測試劑盒說明書人白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

      人白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

      人白三烯E4(LTE4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT50支/包

      人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:500克

      人白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:保存:-20℃10片

      人白細(xì)胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT5克

      人白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT100張/包

      人白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

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