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      當(dāng)前位置:首頁(yè)  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  PCR檢測(cè)試劑盒  -  50T海水派琴蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

      海水派琴蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

      產(chǎn)品簡(jiǎn)介

      海水派琴蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
      上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
      β-OHB檢測(cè)試劑盒所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗(yàn)的均一性

      更新時(shí)間:2021-03-13
      訪問(wèn)次數(shù):537
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      注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

       產(chǎn)品名稱(chēng)

       海水派琴蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

       英文名稱(chēng)

       Perkinsus marinusPCR

       貨號(hào)

       LZP7135

      組成及試劑配制:
      1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
      2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
      3、 樣品稀釋液:1×20ml。
      4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
      5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
      ?
      實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
      一、試劑準(zhǔn)備
      1. DNA模板
      2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
      3.10×PCR Buffer
      4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
      5.Taq酶
      二、操作步驟
      1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      ddH2O至               50 μl
      PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
      2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
      3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
      4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
      三、注意事項(xiàng)
      1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
      2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
      3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
      4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
      5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
      6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
      7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
      Anthrone軟脂酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC)聚乙烯 6-98 Mw ~47,000

      Thiomichler's ketone軟脂酸 97%聚乙烯 8-88 Mw ~67,000

      Michler's ketone軟脂酸 99%四氧化三鈷 CP,Co 72.0~73.5%

      Phenylfluorone正戊 GR,99%四氧化三鈷 99.9% metals basis

      PMBP2-苯乙 Standard for GC,>99.5%(GC)鈷酸鋰 99.8% metals basis

      PMP2-苯乙 CP,98%乙酰氯 AR,98.5%

      Phenidone2-苯乙 AR,99%乙酰溴 97%

      α-Naphtholbenzein2-苯乙 ≥99%, FCC, FG三乙基芐基氯化銨 98%

      Azocarmine B正 GCS,≥99.8% (GC) 異丁酰氯 98%

      Azocarmine G正 AR,99.0%  酰溴  95%

      Thionin正 CP,98.5% 酰氯 98%

       Tartrazine正  for HPLC, ≥99.9%四丁基溴化銨 CP,98.0%

      Allura Red AC正  ACS, ≥99.5%四乙基溴化銨 98%

      Sunset Yellow FCF正 分析標(biāo)準(zhǔn)品蒽醌 CP

      Lissamine rhodamine B正 農(nóng)殘級(jí)2-甲基萘 97%

      Phesafranine酸 AR,≥99.5% (GC) N,N,N',N'-四甲基-1,3-二胺 97%

      富馬酸酮替芬IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific)Rabbit Anti-rat IgM/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的兔抗大鼠IgM

      富馬酸酮替芬(標(biāo)準(zhǔn)品)Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgM

      酮咯酸Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/PE  PE標(biāo)記的兔抗大鼠IgM

      來(lái)氟米特PTEN Blocking PeptideRabbit Anti-rat IgM/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗大鼠IgM

      來(lái)氟米特(標(biāo)準(zhǔn)品)FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Rabbit Anti-rat IgM/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗大鼠IgM

      左氧氟沙星LC3B (D11) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Rabbit Anti-rat IgM/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗大鼠IgM

      左氧氟沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)SignalSilence® BRCA1 siRNA IRabbit Anti-rat IgM/Cy7  Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgM

      氯諾昔康Voristat (SAHA)Rabbit Anti-rat IgM/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的兔抗大鼠IgM

      氯諾昔康(標(biāo)準(zhǔn)品)Mo-Methyl-Histone H3 (Lys79) (D5X1S) Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/Cy5  Cy5標(biāo)記的兔抗大鼠IgM

      洛沙坦/氯沙坦SignalSilence® γ-Catenin siRNA I (Mouse Specific)Rabbit Anti-rat IgM/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgM
      海水派琴蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)人美洲商陸素(PWM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1公斤

      人免疫反應(yīng)性生長(zhǎng)激素(irGH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:2~8℃350ku

      人免疫核糖核酸(Irna)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:保存:-20℃1克

      人免疫球蛋白AFc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:1克

      人免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:保存:-20℃100毫克

      人免疫球蛋白EFc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:500克

      人免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:50毫克

      人免疫球蛋白GFc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:10毫克
      檢測(cè)步驟:
      一、 試劑的準(zhǔn)備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
      試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
      熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
      7.2 qPCR反應(yīng)條件
      將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
      推薦循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

       

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