樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

產(chǎn)品屬性：

檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

磷脂酰絲氨(PS)試劑盒異甘草硝銠溶液 5 % 溶液2,4-二溴苯 98%

磷脂酰絲氨(PS)試劑盒異甘草素三化釕 水合物 38.0-42.0% Ru basis2,4-二溴苯 97%

膽磷甘油酯(PC/CPG)試劑盒異鉤藤二四氨鈀 Pd ≥43.0%2,5-二氧溴苯 98%

膽磷甘油酯(PC/CPG)試劑盒異古倫賓4-乙酰嗎啉 98%4-溴-2-氟苯 98%

總膽汁(TBA)試劑盒 異葒草二乙氨乙 99%2-溴-4-氟 98%

總膽汁(TBA)試劑盒 異槲皮N-酰嗎啉 99%3,4-二溴苯 97%

載脂蛋白C3(Apo C3)試劑盒異黃腐4-(2-羥乙)嗎啉 99%3,4-二溴苯 70%

載脂蛋白C3(Apo C3)試劑盒異黃芪皂I1-（2-羥乙）哌啶 99%4-芐氧-3-氟苯 98%

膽固(CH)試劑盒異黃芪皂IIN-嗎啉 GR，99%2-芐氧苯 96%

膽固(CH)試劑盒異茴芹內(nèi)酯N-二乙 99%3-芐氧苯 98%

金屬硫蛋白2(MT2)試劑盒異莨菪亭N-嗎啉-N-氧化物 50%水溶液3-聯(lián)苯 98%

金屬硫蛋白2(MT2)試劑盒異類(lèi)葉升麻β-巰乙 生物技術(shù)級(jí) （劇品）3,4-二氧溴苯 98%

可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)試劑盒異連翹酯Aβ-巰乙 AR,99.0%（劇品）3,4-二溴苯 99%

可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)試劑盒異蓮心β-巰乙 CP,95.0%（劇品）4-芐氧-2-氟苯 96%

3-硝酪氨(3-NT)試劑盒異龍腦鈦鋇 粉末,<2 μm, 99.5% metals basis2-聯(lián)苯 97%

3-硝酪氨(3-NT)試劑盒異綠原A化鋇，二水 CP,99%4-(Boc-氨)苯 97%
ADIPOR2脂聯(lián)素受體2ELISA試劑盒革蘭氏染色法的意義就在于鑒別細(xì)菌，把眾多的細(xì)菌分為兩大類(lèi)，革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。首先，細(xì)菌經(jīng)初染劑結(jié)晶紫初染成藍(lán)紫色，再加媒染劑與結(jié)晶紫結(jié)合成結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物，從而增強(qiáng)了染料與細(xì)菌的結(jié)合力。

革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌（G+）的細(xì)胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，壁厚，類(lèi)脂含量低，用脫色劑脫色時(shí)細(xì)胞壁脫水，使肽聚糖層的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮小，透性降低，從而使結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物不易被洗脫而保留在細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)脫色和復(fù)染后仍保留初染劑的藍(lán)紫色。而革蘭氏陰性菌（G-）細(xì)胞壁類(lèi)脂含量較多，肽聚糖層較薄且肽聚糖為平面片層結(jié)構(gòu)，易被脫色劑溶解，使細(xì)胞壁通透性增高，結(jié)合的染料復(fù)合物容易泄漏，細(xì)菌被脫色為無(wú)色，再經(jīng)復(fù)染液復(fù)染為紅色。

1. 將涂片在火焰上固定，滴加R1 初染劑染1 分鐘，水洗。

2. 滴加R2 媒染劑作用1 分鐘后水洗。

3. 滴加R3 脫色劑，此時(shí)應(yīng)將玻片不時(shí)搖動(dòng)，直至無(wú)紫色脫落為止，染30 秒鐘，水洗，水流不可太大。

4. 滴加R4 復(fù)染液染色30 秒，水洗，待干，鏡檢。

染色結(jié)果：革蘭氏陽(yáng)性菌為紫色，革蘭氏陰性菌為紅色。